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非洲豬瘟的熒光定量PCR現場快速檢測操作示范

時間:2019-07-01    點擊: 次    來源:國測生物    作者:佚名 - 小 + 大

一、樣本裂解處理(樣本處理區)

吸取核酸釋放劑100μL于1.5mL離心管中,加入經前處理的組織勻漿上清,血清、血漿、全血,拭子浸泡液等樣品20 μL,蓋上管蓋充分混勻,95℃加熱處理10 min,然后12000 rpm離心1 min,取上清作為模板進行擴增。

1. 注意裂解上清應盡快進行后續實驗。

2. 視頻中有用豬警-2000或水浴鍋進行熱處理的方法,兩種方法二選一。

二、反應體系的配置(試劑準備區)

根據待測樣本、陰性對照以及陽性對照的數量,按比例(ASFV-反應液38 μL/頭份+DNA 酶混合液2 μL/頭份+ ASFV-內置參照0.5μL/頭份)取相應量的試劑,充分混勻成PCR-Mix,瞬時離心。

1. 取出包裝盒中的各組分(酶混合液除外),室溫放置,待其回溫融化。

2. 將包括酶混合液在內的各組分混勻后,瞬時離心備用,降低耗損。

三、樣本加樣

根據待測樣本、陰性對照、陽性對照的數量準備反應管,向每個反應管加入40 μL PCR-Mix,吸取已處理的樣本DNA、陰性對照、陽性對照各10 μL加入對應反應管,蓋好管蓋,轉移到擴增區。

先加陰性對照-封蓋,然后加待測樣本-封蓋,最后加陽性對照,降低污染。

四、上機擴增

1. 打開軟件:點擊實驗向導,進入基本設置,根據實驗要求填寫信息,控溫方式勾選“fast控溫”,其他默認;

2. 孔板編輯:勾選待測樣本的反應孔,勾選“選擇項目”中設置好的程序,同時勾選陰/陽性對照對應的反應孔,勾選“樣本類型”做出對應選擇。

3. 樣品信息:對每份待測樣本進行樣品信息登記,點擊“開始”,進行擴增實驗。

注意:

1. 可以實時的在狀態欄中對運行狀態、溫度、曲線等指標進行檢查。

2. 45分鐘即可完成擴增實驗。

五、結果分析及報告

擴增實驗完成后,界面會多出“實驗分析”項,進入可對結果進行分析,可在“反應孔信息表”框中對樣品的名稱、檢測項目、檢測目標、Ct值、濃度、判定等指標進行顯示,參數設置確定后,可對勾選的樣本結果進行報告輸出。

點擊軟件界面上方的 “實驗表格”選項,會自動生成結果報告,點擊“實驗數據”選項,可導出具體的實驗數據。

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